双探针杂交技术(lightcycler),理学-生物学-生物工程-生物技术-生物技术-基因组工程-连接酶链式反应,使用两种不同荧光标记的杂交探针与目的片段结合,在结合过程中,当供体荧光基团与受体荧光基团靠近时,通过荧光共振能量转移使受体荧光被激发,产生的荧光被仪器读取的实时荧光定量聚合酶链反应技术。原理需要设计两条荧光标记的探针:第一条探针的3′端标记供体荧光基团;第二条探针的5′端标记受体荧光基团,并且第二条探针的3′端必须被封闭,以阻止DNA聚合酶以第二条探针作为引物起始DNA的合成。两条杂交探针在目的基因上的互补序列应该相互临近,第二条探针和第一条探针首尾相接。受体荧光和供体荧光具有不同的波长,当两条探针都结合到目的基因上后,受体和供体荧光基团相互靠近,荧光共振能量转移(FRET)才能发生,此时供体荧光被猝灭,而受体荧光被激发。由于荧光猝灭的程度与起始模板的量成反比,以此可以进行PCR定量分析。在聚合酶链反应(PCR)每个循环的变性和延伸阶段,两条探针分散在分散液中,并且彼此分离,因此只能检测到供体荧光信号。