迭代饱和突变(iterative saturation mutagenesis),理学-生物学-生物工程-酶工程-酶工程-酶分子改造-酶定向进化,在已知酶三维结构的情况下,按照空间结构对突变位点进行分区来构建突变库,通过初筛和迭代复筛直至达到酶定向进化目标的人工定向进化策略。方法2007年,德国化学家M.T.瑞茨[注]等提出并实施了迭代饱和突变策略,在底物选择性未受影响的情况下,成功将枯草芽孢杆菌脂肪酶A的热稳定性(T5060,酶加热60分钟催化活性剩余50%时的温度)从48℃提高到了93℃。该定向进化策略可简化如下:在酶三维结构的指导下,将与酶某一催化性质功能相关的位点按位置分为A、B、C、D四个突变库(突变库个数视具体情况而定),每个突变库一般包含3个氨基酸残基以内的同时饱和突变库,可用紧邻间距分布(NNS)等简并库;对所有突变库分别进行筛选,可以分别得到4个突变库中的最优突变体,并且催化性质上有a > b >c > d;以突变体a为父本,再次构建B突变库进行筛选,得到最优突变体e;接着以e为父本,按此方法依次构建C突变库进行迭代筛选,直至催化性质达到目标要求突变体g为止(见图)。