二硫键分析（disulfide bond analysis），医学-现代医学-药学领域-〔生物技术与生物制品鉴定〕-治疗用生物制品检定-生物技术药检定-生物技术药检定方法，应用液相色谱-质谱分析等技术手段，鉴定重组蛋白药物中半胱氨酸残基的巯基之间形成二硫键的情况。二硫键是蛋白质中一类重要的共价键，由两个半胱氨酸残基中的巯基氧化脱氢形成。二硫键的正确形成对于维持蛋白质的正常空间结构和生物学功能至关重要，因此分析重组蛋白药物中的二硫键形成情况是其结构确证的重要内容。二硫键分析的主要方法是高效液相色谱-质谱串联测定肽图法（液质肽图法）。根据待测蛋白质的理论氨基酸序列选择合适的蛋白酶，使酶切所得的肽段中仅含有1个半胱氨酸。酶切前不能对蛋白质进行还原处理以保留二硫键连接信息。将酶切所得肽段进行液质肽图分析，如果两个半胱氨酸之间形成二硫键，则其所在肽段会通过二硫键连接在一起，经过对质谱数据的解析可以鉴定二硫键连接肽段，从而鉴定二硫键连接方式。如果某肽段中含有两个以上半胱氨酸，则不能直接通过以上方式确定，还需进行串联质谱分析，通过对肽段碎片的分析来鉴定二硫键连接方式。