己糖激酶是六碳糖的磷酸化酶，催化使葡萄糖从稳定状态变为活跃状态，活化一个葡萄糖需要消耗1个ATP，一个ATP放出一个高能磷酸键，大约放出30.5kj自由能，大部分变为热量而散失，小部分使磷酸与葡萄糖结合生成葡萄糖-6-磷酸。在己糖激酶催化下，葡萄糖和ATP发生磷酸化反应，生成葡萄糖-6-磷酸(G-6-P)与ADP。前者在葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)催化下脱氢，生成6-磷酸葡萄糖酸内酯，同时使NADP还原成NADPH。反应式如下：葡萄糖+ATP→G-6-P+ADP;G-6-P+NADP→6-GP+NADPH+H。根据反应方程式，NADPH的生成速率与葡萄糖浓度呈正比，在波长340nm监测吸光度升高速率，计算血清中葡萄糖浓度。