酸性磷酸酶试验（acid phosphatase test），工学-公安技术-刑事科学技术，最常采用的精斑预实验方法。酸性磷酸酶试验的检验对象是疑似精液斑的斑痕。酸性磷酸酶广泛分布于人体液、分泌液及各脏器中，但其含量及活性各不相同。精液中的酸性磷酸酶（ACP）含量极高，浓度约为540～4000单位/毫升，高于其他体液、分泌液与组织提取液100倍以上。因此酸性磷酸酶试验可以作为精斑预实验。本试验对精斑的特异性较差，人体中其他含少量酸性磷酸酶的物质，如心脏、肝、肺、肾等组织，男性尿液，均可能呈阳性反应。鼻涕、唾液、汗液也呈较弱的阳性反应。因此，本试验不能做精斑的确证试验。检验酸性磷酸酶的方法很多，可用磷酸苯二钠试验、α-磷酸萘酚-固兰B方法、琼脂扩散法及电泳法等。常用的瓦拉克（Walker test）法，其试验原理是在pH为5，温度为37℃的条件下，酸性磷酸酶能分解磷酸钙β-萘酯，产生β-萘酚。后者遇到重氮盐类即呈现橙红色反应。这种色素不溶于水，附着于载体含有酸性磷酸酶的部位，很容易观察。