序列饱和突变(sequential saturation mutagenesis),理学-生物学-生物工程-酶工程-酶工程-酶分子改造-酶定向进化,利用含通用碱基的随机长度的单向引物对单链DNA模板进行扩增,然后在常规聚合酶链反应(PCR)中将通用碱基随机替换为标准碱基的单链DNA突变技术。经典的随机突变技术易错PCR在引入突变过程中,往往会出现DNA聚合酶的碱基偏好性。2004年,德国生物学家U.施瓦内贝格[注]等提出了序列饱和突变方法,具体步骤如下:①随机片段的模板DNA库的构建。在PCR体系中添加核苷酸类似物(dATPaS),进行全基因的大量扩增,该类似物能被随机掺入新合成的DNA分子中。②加入碘液,在dATPaS掺入处裂解DNA双链,从而获得长度不等的DNA片段。③利用正向引物5′端的生物素标记纯化出单链DNA并进行纯化。④利用末端转移酶在步骤③中得到的单链末端添加通用的次黄嘌呤脱氧核苷酸,并以该单链为正向引物,与单链互补链为模板扩增全长基因。⑤以步骤④中制备的全长基因为模板进行常规PCR,以dNTPs替换通用的次黄嘌呤核苷酸。