插入失活法(insertional inactivation),理学-生物学-生物工程-生物技术-生物技术-基因组工程-插入失活法,将外源DNA片段插入到载体的某一基因内位点,使此基因失去其原有的活性和表性特征,用于筛选重组DNA转化子中是否含有目的基因的方法。发展简史插入失活法最经典的例子就是pBBR322质粒。pBR322质粒长度为4363碱基对,含有2个标记基因:一个是氨苄青霉素抗性基因;另一个是四环素抗性基因。已知pBR322DNA分子中有7种常见限制性内切核酸酶EcoRⅤ、NheⅠ、BamHⅠ、SphⅠ、SalⅠ、XmaⅢ和NruⅠ,它们的识别位点位于四环素抗性基因内部,另外有2种限制性内切核酸酶ClaⅠ和HindⅢ的识别位点位于四环素抗性基因的启动子区,在这9个位点上插入外源DNA都会导致四环素抗性基因的失活。还有3种限制酶ScaⅠ、PvuⅠ和PstⅠ的识别位点位于氨苄青霉素抗性基因内部,在这些位点插入外源DNA会导致氨苄青霉素抗性基因的失活。插入失活法的筛选标记基因除抗性基因外,还包括拥有特异性的酶,如β-半乳糖苷酶。