pcr扩增仪基本概念 聚合酶链锁反应,Polymerase chain reaction,简称PCR,是一种分子生物学技术,用于扩增特定的DNA片段,这种方法可在生物体外进行,不必依赖大肠杆菌或酵母菌等生物体。PCR这项技术,被广泛地运用在医学和生物学的实验室,例如用于判断检体中是否会表现某遗传疾病的图谱、传染病的诊断、基因复制,以及亲子鉴定。 历史发展 PCR这项技术是由凯利·穆利斯(Kary Mullis)发明,并因此在七年之后,1993年10月,获得了诺贝尔化学奖该项殊荣。穆利斯的想法是,利用一种人工方法,和反复相同程序的方法,并利用一种特殊的酶——即DNA聚合酶来扩增特定的DNA片段。DNA聚合酶天然存在于生物体内,在细胞分裂前进行DNA的复制。当DNA开始复制时,解旋酶将双股的DNA分开成两个单股。DNA聚合酶便结合在两DNA单股链上,生成互补链。在穆利斯初的PCR反应中,将DNA聚合酶用于体外试验。双链DNA被加热到96℃,使得双链分离成为两条单链。但是在这个温度下,DNA聚合酶被破坏,因此在每个循环的加热步骤后必须补充新的聚合酶。穆利斯的原始PCR反应效率极低,需要大量时间和DNA聚合酶,并且在整个PCR反应中都需要人来照看。后来,由嗜热细菌水生栖热菌(Thermus aquaticus)体内产生的DNA聚合酶改善了这种低效的PCR反应。由于嗜热细菌生活在温度达到50至80 °C (122至176 °F)的间歇泉中,它的DNA聚合酶具有耐热性。在用于PCR反应时,高温并不能破坏这种DNA聚合酶,因此不需要不断加入新的聚合酶,PCR反应由此变得简单并且可以由机器操作。初的具有耐热性的DNA聚合酶来自于水生栖热菌(Thermus aquaticus),因此被称为Taq。Taq酶被广泛用于当前的PCR操作中。Taq酶的缺点是它缺少3'->5'校正外切酶活性,因此在复