分泌片段

分泌片段，片段分泌方法从FCCL/HN株基因组DNA中PCR扩增P1332基因片段，P332-RO、P332-R1和P332-R2；用PCR扩增法合成鼠IgG轻链信号肽的编码序列。用定向克隆法分别构建分泌型重组质粒pcDNA3-s—P332-R0、pcDNAl-s—P332-R1、pcDNA3-s—P332-R2和非分泌型重组质粒pcDNA3-s—P332-R0、pcDNA3—s—P332-R1、pcDNA3—s—P332-R2。阳性克隆的重组质粒DNA经酶切、PCR扩增及测序鉴定。结果PCR扩增得到特异的FCCl/HN株P1332基因片段，P332-R0、P332-R1、P332-R1，大小分别为489、429和393bp。用PCR扩增法合成63bp的Balb/c小鼠IgG轻链信号肽的编码序列。酶切、PCR及测序鉴定表明获得了正确的含P1332基因片段的分泌型、非分泌型重组质粒。结论成功构建分别包含恶性疟原虫P1332基因片段-1332-R0、P332-R1和P332-R2的分泌型、非分泌型真核表达重组质粒。