直接测序法(directed sequencing),理学-生物学-生物工程-生物技术-生物技术-基因组工程-连接酶链式反应,通过在聚合酶链反应(PCR)体系中掺入双脱氧核苷三磷酸(ddNTP),产物经过电泳分离和放射自显影,进行序列判读的测序方法。自从1975年引入ddNTP作为链终止剂,DNA序列测定技术得到迅速发展。ddNTP在DNA聚合酶作用下,通过其5′三磷酸基团可以掺入正在延伸的DNA链中,但由于其脱氧核糖3′位置缺少一个羟基,因此不能同后续的脱氧核苷三磷酸(dNTP)形成磷酸二酯键,使得DNA链的延伸被终止。根据此原理,在DNA合成反应混合物的4种dNTP中加入一定比例的一种ddNTP,dNTP参与的链延伸将与ddNTP参与的链终止发生随机竞争,最终反应产物是一系列的寡核苷酸链,其长度取决于从用以起始DNA合成的引物末端到出现过早链终止的位置之间的距离。在4组独立的酶反应中分别采用4种不同的ddNTP,结果将产生4组寡核苷酸链,它们将分别终止于模板链的每个A、C、G或T的位置上,通过电泳分离和放射自显影,就可以进行序列判读。